ACTIVITE TECHNOLOGIQUE 01 – CONTROLES QUALITES DANS LE LABORATOIRE DE BACTERIOLOGIE D'UN HÔPITAL

« TSTL ACTIVITE TECHNOLOGIQUE – BIOTECHNOLOGIES 2023-2024 THEME N°1 LES TESTS DIAGNOSTIQUES SUR LES PRODUITS BIOLOGIQUES ACTIVITE TECHNOLOGIQUE 01 – CONTROLES QUALITES DANS LE LABORATOIRE DE BACTERIOLOGIE D'UN HÔPITAL SITUATION EXPERIMENTALE  De nombreux patients arrivent tous les jours aux urgences ou aux différents laboratoires des hôpitaux afin d'effectuer des prélèvements qui seront ensuite analysés.  Ces prélèvements peuvent être traités dans différents laboratoires :  Laboratoire de bactériologie pour les recherches et identifications de micro-organismes (bactérie, parasite, virus, champignon).  Laboratoire de biochimie-immunologie pour les dosages et la détection de molécules et d'enzymes.  Laboratoire d'hématologie pour les différentes analyses sanguines. Contexte  L'objectif de ces analyses est double :  Répondre à la demande en fournissant un résultat qualitatif et/ou quantitatif.  Participer au diagnostic en aidant les médecins dans leurs investigations.  De plus, un laboratoire est spécialisé dans les différents contrôles qualités et qui a pour objectifs :  De valider l'ensemble des appareils et consommables utilisés dans les différents laboratoires.  De valider l'ensemble des souches de microorganismes référencés et utilisés.  Dans le cadre de plusieurs contrôles qualités on souhaite : Buts Objectifs de formation et supports théoriques Compétence s évaluées  Valider trois souches bactériennes utilisées : Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis.  Valider deux milieux sélectifs utilisés (Drigalski et Chapman) et la gélose à l’amidon.  Valider la qualité d'une solution tampon utilisée pour fabriquer les milieux de culture.  Incertitude sur la mesure  Logigramme de décision  Méthode qualitative : mise en évidence d’au moins un microorganisme ou pour l’analyse d’un produit pathologique en biologie médicale  Isolement sélectif ou non  Volumétrie directe  Identifier les étapes critiques d’une méthode pour prévenir les risques  Choisir les tests discriminants pour identifier un microorganisme  C1 : Analyser et choisir : Analyser une procédure opératoire pour identifier les sources d’erreurs et choisir le matériel adapté.  C2 : Analyser les risques : Analyser une procédure opératoire pour identifier les dangers et évaluer les risques afin de choisir les mesures de prévention.  C3 : Réaliser : (1) Savoir faire en autonomie en intégrant les mesures de prévention. (2) Présentation des indications de mesures, observations et qualité des résultats.  C4 : Calculer et exploiter : Effectuer les calculs et exploiter les indications de mesure à l’aide des outils numériques.  C5 : Exprimer les résultats – Métrologie : Exprimer les résultats expérimentaux en intégrant la dimension métrologique.  C6 : Interpréter : Interpréter les observations qualitatives ou les résultats quantitatifs. 1 REFLEXION PRELIMINAIRE I) Validation des souches bactériennes utilisées  Escherichia coli est un bacille Gram (-) oxydase (-), lactose (+).  Staphylococcus aureus est une coque Gram (+) catalase (+), mannitol (+).  Bacillus subtilis est un grand bacille sporulé Gram (+) catalase (+), amylase (+).  La procédure d'identification bactérienne nécessite de réaliser un état frais et une coloration de Gram (fiches techniques 1 et 2) et un test enzymatique (fiches techniques 3 et 4). Q1.

À partir des fiches techniques, identifier un danger éventuel (nom et pictogramme(s) associé(s)), en précisant sa nature, la ou les voie(s) de transmission/d’exposition et une situation exposant au danger. Proposer le (ou les) moyen(s) de prévention adapté(s). Q2.

En utilisant les fiches techniques 3 et 4, indiquer une précaution technique à prendre concernant les deux tests enzymatiques. II) Validation des milieux utilisés  Les milieux à valider sont présentés dans les documents 1, 2 et 3. Q3.

Présenter sous forme d'un tableau pour chacun des trois milieux testés :      les agents sélectifs présents. le caractère biochimique lu. l'observation attendue d’Escherichia coli sur le milieu sélectif. l'observation attendue de Staphylococcus aureus sur le milieu sélectif. l'observation attendue de Bacillus subtilis sur le milieu non sélectif. III) Vérification du pH d'une solution tampon utilisé  La solution tampon utilisée pour réaliser les milieux de culture contient de l'acide sulfurique à 3.10-2 mol.L-1.  On souhaite étalonner cette solution pour connaître son pH exact en utilisant la fiche technique 5.  Cette solution tampon doit être au préalable diluée au 1/100 dans de l’eau distillée avant que l’on puisse contrôler son pH. Q4.

Proposer une procédure opératoire pour la réalisation de la dilution de cette solution permettant d’obtenir 100 mL de solution diluée : préciser les volumes, le matériel utilisé et la nature du solvant. Q5.

A partir du principe de la fiche technique 5, écrire l'équation aux grandeurs et aux unités de cH2SO4, solution tampon.

N’oubliez pas de tenir compte de la dilution au 1/100. 2 La réalisation pratique doit débuter par une analyse des risques de l’ensemble des manipulations.

La mise en œuvre des mesures de prévention appropriées à chaque manipulation est évaluée. La réalisation pratique inclura la présentation des indications de mesure et/ou des observations réalisées sur la feuille dédiée nommée cahier de laboratoire. REALISATION PRATIQUE I) Validation des souches bactériennes utilisées  Les trois souches à valider sont présentées sur gélose trypticase soja et noté "E" pour Escherichia coli, "S" pour Staphylococcus aureus et "B" pour Bacillus subtilis.  Pour chacune des trois souches : M1.

Effectuer une description macroscopique. M2.

Réaliser une coloration de Gram et un état frais.

Réaliser une coloration des spores avec la souche de Bacillus subtilis. M3.

Réaliser le test enzymatique approprié (fiches techniques 3 et 4, document 3). II) Validation des milieux utilisés JOUR 1  A partir des trois souches de la partie précédente : M4.

Réaliser une strie de chacune des souches sur une gélose Drigalski, sur la gélose à l’amidon et la gélose Chapman. M5.

Incuber les trois milieux 24-48h à 37°C. JOUR 2 M6.

Effectuer la lecture des différents milieux ensemencés. III) Vérification du pH d'une solution tampon utilisé  La solution tampon à étalonner est noté "H" M7.

Procéder au dosage de la solution "H" d’après la procédure opératoire de la fiche technique 5. PRESENTATION ET EXPLOITATION DES RESULTATS JOUR 1 I) Validation des souches bactériennes utilisées  Pour chacune des souches : Q6.

Rendre compte de la lecture macroscopique de la GTS. 3 Q7.

Rendre compte de la lecture microscopique de la coloration.... »